وثيقة

Agrobacterium Mediated Transformation of cry1C Gene into Omani Tobacco Cultivar

الناشر
Sultan Qaboos University
ميلادي
2007
اللغة
الأنجليزية
الملخص الإنجليزي
Bacillus thuringiensis is a Gram-positive, aerobic bacterium commonly found in soil. This bacterium is characterized by its ability to produce crystalline protein inclusions during sporulation. The protein has insecticidal properties against various insect pest orders such as Lepidoptera, Diptera, Coleoptera, Hymenoptera and Homoptera. These insect pests cause variable losses on agricultural crops in Oman and worldwide. Many B. thuringiensis genes encoding toxic proteins have been cloned and sequenced and are commonly named as cry gene. In this project, B. thuringiensis gene cry1C encoding an insecticidal crystal protein (ICP) directed by the cauliflower mosaic virus (CMV) double 35S promoters was transferred into tobacco plants by Agrobacterium-mediated tissue culture with kanamycin selection. A total of 50.0% transformed and 77.0% control plantlets were obtained. Integration of cry1C gene into tobacco genome was confirmed by polymerase chain reaction (PCR) and southern blot analysis. The Cryic protein concentration was assayed by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and insects bioassay. Seventy percent of the transgenic plants of To generation gave an expected PCR amplicon of 450bp, but no such amplification was observed with control plants. All transgenic plants of Ti generation also showed the expected 450bp PCR amplified VA fragment. These findings were further confirmed by southern blot analysis which showed one hybridization band in the expected size range. No hybridization band was as observed in the control plants. The concentration of Cry1C protein varied considerably ranging from 0 to 96.8 ppb among the leaves of transgenic plants tested by ELISA. About 54% of the transgenic plants produced low level of Cry1C protein (<1 ppb). High level of Cry1C protein (>1ppb) was observed in about 24% of the transformed plants. No Cry1C protein was detected in 22% transgenic plants tested positive with PCR, There was 70.0% mortality of Spodoptera litura feeding on the transgenic plant expressing 96,8ppb of Cry1C protein. Transgenic plant expressing 69.3ppb of Crylc yielded only 16.7% mortality of S. litura. No mortality was recorded for Pseudococcus sp. (mealy bug) feeding on the same transgenic tobacco plants.
الوصف
Thesis
الملخص العربي
Bacillus thuringiensis هي عبارة عن بكتيريا موجبة (Gram positive) ، هوائية وتوجد عادة بالتربة. تتميز هذه البكتيريا بقدرتها على إنتاج البروتين البلوري أثناء عملية التبوغ (sporulation). ويمتلك هذا البروتين خواص مبيد للحشرات ضد مجموعة من الآفات الحشرية مثل الحشرات حرشفية الاجنحة، ثنائية الاجنحة، غمدية الاجنحة، غشائية الأجنحة ومتشابهة الأجنحة، هذه الحشرات تحدث خسائر كبيرة بالمحاصيل الزراعية في عمان وفي كل انحاء العالم. مجموعة من جينات (المورثات) ل . thuringiensis والمسؤولة عن البروتين السام، تم استنساخها ومعرفة تتابع النيوكليدات لها وأطلق عليها cry جين. في هذا المشروع تم نقل جين cry1C B . thuringiensis والمسؤول عن البروتين السام وذو تأثير مبيد حشري والذي يوجه بواسطة Cauliflower Mosaic Virus مضعف المحفز 35S إلى نباتات التبغ عن طريق الأجروباكتيريم في وجود الجين الكاشف (الناخب) kanamycin. تم الحصول على % 50 من النباتات المحورة و 77% من النباتات الغير محورة. عملية التحوير تم الكشف عنها بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل polymerase chain reaction و Southern blot analysis. تركيز بروتين Cry1C تم اختباره ب enzym
- linked immunosorbent assay و الاختبار الحيوي. سبعون في المئة من النباتات المحورة وراثيا لجيل وT اعطت مقطع PCR متوقع ل (450bp )، بينما لم يلاحظ مثل هذا المقطع في النباتات الغير محورة. جميع النباتات المصورة للجيل T اعطت مقطع PCR متوقع أيضا ل (450bp ). تم التأكد من هذه النتائج باستخدام Southern blot analysis والذي اظهر فرقة تهجين واحدة في مدى الحجم المتوقع.
لم يلاحظ فرقة تهجين في النباتات الغير محورة. تركيز البروتين Cry1C اختلف إلى حد بعيد، تراوح من 0 إلى ppb 80 بين أوراق النباتات المحررة والمختبرة ب enzyme -linked immunosorbent assay. أنتجت حوالي 54% من النباتات المحورة المستوى المنخفض البروتين CryIC (أقل من 1ppb). المستوى العالي لبروتين Cry1C (اعلى من 1ppb) لوحظ في حوالي 24% من النباتات المحورة. لم يلاحظ وجود بروتين Cry1C في حوالي 22% من النباتات المحورة والتي اعطت نتيجة موجبة - PCR. كان هناك حوالي 70% نسبة موت ل Spodoptera lituraوالتي تغذت على نباتات محورة احتوت على 96. 8ppbمن بروتين Cry1C . النباتات المحورة والتي احتوت على 69 3ppb من بروتين Cry1C اعطت فقط
. 16.7%نسبة موت ل Spodoptera litura . لم تكن هناك نسبة موت مسجله على البق الحقيقي (Pseudococcus sp . ( mealy bug والذي تغذي على نفس نباتات التبغ المحورة.
قالب العنصر
الرسائل والأطروحات الجامعية

مواد أخرى لنفس الموضوع

الرسائل والأطروحات الجامعية
0
0
Al-Kindi, Mohamed Abdullah Badar.
Sultan Qaboos University
2019