Production of midkine and pleiotrophin by innate antigen presenting cells.

Author
Al-Dughaishiyah, Sumaiya Ahmed Saud.
Publisher
Sultan Qaboos University.
Gregorian
2021
Language
English
Subject
English abstract
Background: Human midkine (MK) is a 13 kDa heparin-binding growth factor, MK family has two members; the founding member MK and the other member is pleiotrophin (PTN). PTN is 18 kDa heparin-binding cytokine. These molecules share 50% sequence identity. They both play fundamental roles in physiological and pathological process. MK production by innate antigen presenting cells (APCs) except myeloid dendritic cells (mDCs) was detected from a previous study conducted in the Department of Microbiology and Immunology, College of Medicine and Health Science, Sultan Qaboos University (SQU). Objectives: This study aimed to investigate the production of MK by stimulated mDCs when isolated by direct labeling method, to optimize the transfection of innate APCs with anti-MK siRNA. In addition, the production of PTN by the stimulated innate APCs was assessed. Methods: MDCs were obtained from peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of healthy individuals (n=3). MDCs were stimulated with Lipopolysaccharides (LPS) to assess the expression of co-stimulatory molecules (CD80 & CD86) by flowcytometry. The MK expression by mDCs stimulated with LPS, poly I:C, RES, and ODN was evaluated by ELISA. Monocytes, macrophages (MΦs), monocyte-derived dendritic cells (MDDCs), mDCs and plasmacytoid dendritic cells (pDCs) were obtained from PBMCs of healthy volunteers (n=3 for each) and then stimulated with LPS, poly I:C, resiquimod, ODN and a combination of all ligands to assess the production of PTN induced by the TLRs signaling pathway. Finally, MDDCs & MΦs were transfected with control Fam-siRNA and MKsiRNA by electroporation and lepofectamine 2000 and then stimulated by LPS. Results: MK was not produced by stimulated mDCs isolated by direct labeling method. MK expression is inhibited in MK-siRNA transfected cells stimulated by LPS. All innate APCs expressed PTN once stimulated with different TLRs ligands. Conclusion: MK is not produced by stimulated mDCs. Therefore, they may not influence the other cells with same manner like other APCs which are able to produce MK. MK production is inhibited in cells transfected with MK-specific-siRNA. Supernatants of these cells will be tested for their biological activities. PTN is expressed by all innate APCs, which suggests a role for PTN in regulating the immune system and some biological activities.
Member of
Theses and Dissertations
Resource URL
https://hdl.handle.net/20.500.12408/9083
Arabic abstract
المقدمة: البروتين ميدكاين (مك) البشري هو عامل نمو للخلايا رابط للهيبارين، وزنه الجزيئي
يساوي?? كيلودالتون. عائلة ميدكاين تتكون من: ميدكاين و بليوتروفين (بتن). (بتن) هو عامل نمو
رابط للهيبارين أيضا، ووزنه الجزيئي يساوي ?? كيلودالتون. يشترك (مك و بتن) بحوالي ?? ? من
التسلسل الجيني، وهما يلعبان أدواراً مهمةً في وظائف الأعضاء والعمليات المرضية. إنتاج (مك)
عن طريق الخلايا المناعية المقدمة للمستضدات ((APCs ما عدا الخلايا المناعية الشجيرية
الجذعية ((mDCs، قد تم إثباته سابقا في دراسة علمية في قسم الأحياء الدقيقة وعلم المناعة،
في كلية الطب والعلوم الصحية، بجامعة السلطان قابوس.
الهدف: تهدف هذه الدراسة إلى التحقق من إنتاج (مك) عن طريق (الخلايا المناعية الشجيرية
الجذعية) المحفزة عندما يتم عزلها بالوسم المباشر، وإيجاد أنسب الظروف لإدخال جزيئات
الحمض النووي الريبي المتداخلة الصغيرة ((siRNA المحددة خصيصا للبروتين (مك) في الخلايا
المناعية المقدمة للمستضدات ،والتحقق من إنتاج (بتن) عن طريق (الخلايا المناعية المقدمة
للمستضدات) المحفزة.
الطريقة: تم عزل (الخلايا المناعيه الشجيرية الجذعية) من خلايا الدم المحيطية أحادية النواة من
متبرعين أصحاء (العدد=3)، وبعد ذلك تم تحفيز هذه الخلايا بواسطة عديدات السكر الدهنية
(LPS)؛ للتحقق من انتاج عنقود التمايز?? و?? (CD80&CD86) بواسطة جهاز قياس التدفق
الخلوي، وللتحقق من إنتاج (مك) من هذه الخلايا المحفزة بعديدات السكر الدهنية (LPS) وحمض
عديد الاينوزينيك وعديدالسيتيديلك ((poly I:C والريسيكويمويد ((RES و النيكلوتيدات منقوصه
الأكسجين (ODN) فقد تم بواسطة المقايسة الامتصاصيَّة المناعيَّة للإنزيم المرتبط(ELISA) . وتم
عزل الخلايا المناعية المقدمة للمستضدات (خلايا وحيدة النواه، الخلايا البالعة، الخلايا المناعية
الشجيريه المستمده من الخلايا وحيدة النواة، الخلايا المناعية الشجيرية الجذعية، والخلايا المناعية
الشجيرية البلازمية) من خلايا الدم المحيطية أحادية النواة، وتم تحفيزها بالمحفزات المذكوره
أعلاه وجميع هذه المحفزات مجتمعة، للتحقق من إنتاجية (بتن) عن طريق تحفيز المستقبلات
الشبيهة بالتول، التي تنقل الاشارات الحيوية بين الخليه. تم إدخال جزيئات الحمض النووي الريبي
المتداخلة الصغيرة في الخلايا البالعة، والخلايا المناعية الشجيرية المستمدة من الخلايا وحيدة
النواة عن طريق جهاز التفريد الكهربي وليبوفيكتماين ???? ومن ثم تم تحفيزها بواسطة عديدات
السكر الدهنية (LPS
النتائج: (مك) لم يُنتج عن طريق الخلايا المناعية الشجيرية الجذعية المحفزة عند عزلها مباشرةً،
وتم تثبيط إنتاج (مك) عن طريق الخلايا المدخل إاليها جزيئات الحمض النووي الريبي المتداخلة
الصغيرة المحددة للبروتين (مك)، وكل الخلايا المناعية المقدمة للمستضدات أنتجت (بتن) عند الشبيهة بالتول.
الخاتمة: (مك) لم يُنتج عن طريق الخلايا المناعية الشجيرية الجذعية المحفزة، والذي ربما يؤكد
عدم لعب هذه الخلايا للدور الذي تقوم به كل الخلايا المناعية المقدمة للمستضدات عند إفرازها
للميدكاين في بعض الأنشطة الحيوية. تثبيط إنتاج (مك) عن طريق الخلايا المدخل إليها جزيئات
الحمض النووي الريبي المتداخلة الصغيرة المحددة للبروتين (مك)، والتي يجب دراسة دور
منتجاتها في بعض الأنشطة الحيوية لهذه الخلايا. كل الخلايا المناعية المقدمة للمستضدات
والمحفزة أنتجت (بتن)، والذي ربما يؤكد لعب هذه الخلايا دوراً في تنظيم جهاز المناعة وبعض
الأنشطة
Category
Theses and Dissertations

Same Subject

Theses and Dissertations
0
0
Al-Hatmiyah, Wadhha Yasser.
Sultan Qaboos University.
2019
Theses and Dissertations
0
0
Al-Reesyah, Iman Abdullah Humaid.
Sultan Qaboos University
2015