Serological molecular and immunohistochemical study of Brucella infection in sheep, goats,camels and cattle from Saham, sultanate of Oman

Author
Al-Farsiyah, Anfal Ali
Publisher
Sultan Qaboos University
Gregorian
2018
Language
English
Subject
Brucellosis in animals
English abstract
ABSTRACT A cluster of 75 human Brucellosis cases was identified during the period of May to July 2016 from the coastal area in the north of Oman mainly in Saham in the North Batinah Governorate. During the period of the outbreak the seroprevalence was 1.95%, 4.47%, 1.06% and 18.18% in goat, sheep, cattle and camels respectively which was determined based on an animal being positive in Rose Bengal test LPS-ELISA. Test-and-slaughter and quarantine of suspected animal were implemented in the area by the Ministry of Agriculture and Fisheries. A proportional allocation method was used to determine the sample size from six randomly selected villages from Saham. A total of 399 animals were selected; goats (n=100), sheep (n=99), cattle (n=99) and camels (n=101) and tested using RBT and LPS-ELISA. The results showed a drop in the sero-positivity to 0% in goats and camel and to 1.01% in sheep and cattle which indicated the effectiveness of the test-and-slaughter strategy for the control and eradication of Brucellosis. SS Bp26 is a conserved protein among all members of the genus Brucella that is believed to not cross-react with other Gram negative organism. To assess a diagnostic potential of Bp26, the recombinant protein was cloned, expressed in E. coli, purified and used as an antigen in an indirect ELISA (Bp26-iELISA). Four groups of sera from naturally B. melitensis-infected goats were tested. Group A were serologically positive animals in three tests (RBT, LPS-ELISA and CFT tests). Group B were serologically positive animals in two tests (RBT and LPS-ELISA) or (LPS-ELISA and CFT). Group C were serologically positive animals in one test only (RBT, IELISA or CFT). Group D were sera from 10 healthy goats used to determine the cutoff and the specificity of the ELISA. A cutoff value of(0.42) corresponding to a 99% confidence interval was employed to determine a true positive. Group A and group B has values of 1.79 and 0.93 respectively and were considered significantly above the denoted cutoff value. Group C satisfied a positive value if a 95% CI was used. In addition, one Brucella melitensis was isolatesd from a bronchial lymph node. It was cultured in Farrell's medium and identified using Vitek 2 system. The Multiplex PCR also clearly demonstrated bands characteristic of Brucella melitensis. Furthermore, an anti Bp26 mouse serum was used in an immunohistochemical study to localize Bp26 in a variety of tissue sections. Positive staining was found on the spleen and mesenteric lymph nodes. Based on the results of the study Bp26 is potential diagnostic antigen for the serodiagnosis of Brucella in goats
Member of
Theses and Dissertations
Resource URL
https://hdl.handle.net/20.500.12408/1585
Arabic abstract
الملخص

خلال الفترة من شهر مايو إلى شهر يوليو 2016 ظهرت بؤر الإصابات بشرية بالحمى المالطية (البروسيلا) في المنطقة الساحلية في شمال عمان، وتحديدا بولاية صحم في محافظة شمال الباطنة ، حيث بلغ عدد الحالات البشرية 75 حالة. وكانت نسبة الانتشار المصلي في الحيوانات 1, 95% و 74, 47 و 1, 06٪ و 718 , 18 في الماعز والضان والأبقار والجمال على التوالي خلال فترة تفشي المرض، والتي تم تحديدها بناء على وجود أجسام مضادة لعدوى بكتيريا البروسيلا في مصل الحيوان باستخدام أختبار الريزينغال (RET) والمقايسة الإمتصاصية المناعية للإنزيم المرتبط (ELISA). وكإجراء احترازي قامت وزارة الزراعة والثروة السمكية باستخدام استراتيجية الاختبار والذبح للحيوانات المشتبه اصابتها بالحمى المالطية. استخدمت طريقة التوزيع النسبي لتحديد حجم العينة المدروسة من ست قرى مختارة عشوائية من ولاية صحم حيث تم اختيار 399 حيوان تشمل 100 من الماعز و99 من الضأن و99 من الأبقار و 101 من الجمال ثم تم اختبارها باستخدام اختبار الروزينغال (RBT) والمقايسة الإمتصاصية المناعية للإنزيم المرتبط (ELISA). وأظهرت النتائج انخفاضة في نسبة الانتشار المصلي إلى 70 في الماعز والجمال و 1. 01 % في الضأن والأبقار وذلك يشير إلى فعالية استراتيجية الاختبار والذبح لمكافحة وإبادة الحمى المالطية. يعتبر بروتين Bp26 ثابت بين جميع أعضاء جنس البروسيلا والذي يعتقد أنه لا يتفاعل مع البكتيريا الأخرى سالبة الغرام. لدراسة امكانية استخدامه للتشخيص تم استنساخ البروتين و استخلاصه باستخدام بكتيريا الإشريكية القولونية (E coli)، ثم تمت تصفيته واستخدامه كمستضد في المقايسة الإمتصاصية المناعية للإنزيم المرتبطة غير المباشر ( Bp26 - iELISA ). تم اختبار 4 مجموعات من المصل لماعز مصابة طبيعية بالبروسيلا ( B, melitensis )، حيث كانت المجموعة (1) حيوانات إيجابية مصليا في 3 اختبارات (
RBT , ELISA and CFT). وكانت المجموعة (ب) حيوانات إيجابية مصلية في اختبارين ( RBT, ELISA ) أو (ELISA and CFT). والمجموعة (ج) كانت حيوانات إيجابية مصليا في اختبار واحد (RBT or ELISA or CFT). أما المجموعة (د) فكانت مصلا من 10 من الماعز السليمة (غير المصابة تستخدم لتحديد القيمة القاطعة (cutoff value) وخصوصية المقايسة الإمتصاصية المناعية للإنزيم المرتبط (ELISA). واستخدمت القيمة القاطعة ( 0, 42) المناظرة لمستوى الثقة 99% لتحديد الإيجابية الحقيقية. حيث كانت قيمة المجموعة (أ) والمجموعة (ب) ( 1 , 79) و( 0, 93) على التوالي، والتي تعتبر أعلى بكثير من القيمة القاطعة المشار إليها. بينما تعتبر المجموعة (ج),خدمات ذات إيجابية حقيقية إذا تم استخدام مستوى الثقة 95. بالإضافة إلى ذلك تم عزل بكتيريا البروسيلا ( B, melitensis ) من الغدة اللمفاوية القصبية. وقد تمت زراعتها في وسط فاريل (Farrell Medium)، وتم تمييزها بأستخدام نظام 2 Vitek. وأظهر تفاعل البلمرة المبتسلسل المتعدد (Multiplex PCR الخطوط المميزة ل. B. rmelitersis . علاوة على ذلك تم استخدام مضاد البروتين Bp26 من مصل الفار (anti - Bp26 mouse serum) في تقنية كيمياء المناعة النسيجية (IRC) Immunohistochemsitry ) لتحديد البروتين Bp26 في مجموعة من القطاعات النسيجية. وقد تم العثور على صبغات ايجابية في كل من الطحال و الغدد اللمفاوية المساريقية. استنادا إلى نتائج الدراسة يعتبر بروتين Bp26 هو المستضد المحتمل للتشخيص المصلي للبروسيلا في الماعز.
Category
Theses and Dissertations

Same Subject

Theses and Dissertations
0
0
Al-Toobiyah, AlGhalya Nasser Hamdan.
Sultan Qaboos University
2016